需要進(jìn)行 BCA 法的工作流程：

• 蛋白質(zhì)純化過程，以確定產(chǎn)量和純度。
• 凝膠電泳前，確保蛋白負(fù)載量相等。
• 蛋白質(zhì)標(biāo)記或修飾前，確保使用了正確量的蛋白質(zhì)。
• 細(xì)胞培養(yǎng)研究中，確定蛋白質(zhì)表達(dá)水平。

BCA 檢測的最佳方法

標(biāo)準(zhǔn) BCA 法

最適合蛋白質(zhì)濃度范圍在測定線性范圍內(nèi)、樣品數(shù)量適中的常規(guī)應(yīng)用。

1. 樣品制備： 首先收集和制備蛋白質(zhì)樣本，確保樣本中不含干擾物質(zhì)。
2. 制備 BCA 工作試劑： 這通常包括將 BCA 溶液與硫酸銅（II）溶液按特定比例混合，通常由檢測試劑盒制造商提供。
3. 混合與孵育： 通常在比色皿或試管中將蛋白質(zhì)樣品加入 BCA 工作試劑。通常在 37℃下孵育混合物 30 分鐘。
4. 測量： 孵育結(jié)束后，使用分光光度計在 562 nm波長處測量每個樣品的吸光度。
5. 分析： 將吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（通常是牛血清白蛋白 (BSA)）的吸光度值進(jìn)行比較，以確定樣品的蛋白質(zhì)濃度。

微孔板 BCA 法

非常適合需要同時分析許多樣品的高通量篩選。它的試劑使用效率高，常用于大型研究或工業(yè)環(huán)境。

1. 樣品制備： 與標(biāo)準(zhǔn)檢測一樣，首先制備蛋白質(zhì)樣品。
2. BCA 工作試劑： 制備相同的試劑，但要根據(jù)微孔板孔調(diào)整體積。
3. 分裝和孵育： 使用多通道移液器將蛋白質(zhì)樣品和 BCA 工作試劑分裝到 96 孔板的孔中。通常在 37℃ 孵育 30 分鐘。
4. 測量： 使用微孔板閱讀器在 562 nm波長處測量吸光度。
5. 分析： 與標(biāo)準(zhǔn)方法一樣，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定蛋白質(zhì)濃度。

針對含去垢劑樣品的改良 BCA 法

專門用于含有去垢劑的樣本，因?yàn)槿ス竸蓴_ BCA 反應(yīng)。這種情況常見于從某些細(xì)胞類型或組織中提取蛋白質(zhì)，或研究包埋在膜中的蛋白質(zhì)時。

1. 樣品制備： 提取樣品中的蛋白質(zhì)，注意去垢劑的濃度。
2. BCA 工作試劑： 按標(biāo)準(zhǔn)檢測方法配制。
3. 添加洗滌劑相容性試劑： 這些試劑通常在專門的 BCA 試劑盒中提供，添加這些試劑是為了消除去垢劑的干擾作用。
4. 混合與孵育： 與標(biāo)準(zhǔn)測定一樣，混合樣品和工作試劑并孵育。
5. 測量與分析： 使用分光光度計測量吸光度，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線確定蛋白質(zhì)濃度。

如何實(shí)現(xiàn) BCA 法的自動化：

• 液體處理工作站： 這些機(jī)器設(shè)計用于自動將液體移液到指定容器中，確保準(zhǔn)確性和一致性。
• 集成系統(tǒng)： 有些平臺集成了從樣品添加到讀取吸光度的整個過程，從而簡化了工作流程。
• 軟件： 自動化軟件可用于設(shè)置協(xié)議，確保每次檢測都以相同的方式進(jìn)行。

與手動移液相比，自動化 BCA 法的優(yōu)勢：

• 一致性： 自動化可確保每次都以相同的方式執(zhí)行每個步驟，從而減少可變性。
• 效率： 自動化系統(tǒng)可同時處理多個樣本，加快處理速度。
• 準(zhǔn)確性： 自動移液減少了體積錯誤和交叉污染的風(fēng)險。
• 數(shù)據(jù)完整性： 自動化系統(tǒng)通常配有集成的數(shù)據(jù)管理解決方案，可確保正確記錄和存儲結(jié)果。