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質(zhì)譜分析

一種測量離子質(zhì)荷比的分析技術(shù)。其目的是通過測量氣相離子的質(zhì)荷比和豐度來確定樣品中存在的化學物質(zhì)的數(shù)量和類型。

需要質(zhì)譜分析的工作流程:

  • 蛋白質(zhì)鑒定和表征:確定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)和翻譯后修飾。
  • 定量蛋白質(zhì)組學:測量不同樣本之間蛋白質(zhì)表達水平的變化。
  • 小分子分析:包括藥物代謝研究、殘留分析、環(huán)境污染物檢測。

進行質(zhì)譜分析的方法:


MALDI-TOF(基質(zhì)輔助激光解吸/電離--飛行時間質(zhì)譜,Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization – Time of Flight)

MALDI-TOF 是一種 “軟電離 ”技術(shù),非常適合分析蛋白質(zhì)和肽等大型生物分子,而不會造成碎裂。通過將樣品與基質(zhì)混合并使用激光脈沖,它可以使樣品離子化。它的主要優(yōu)勢在于能夠快速分析大分子,因此在蛋白質(zhì)組學和微生物鑒定方面特別有用。

電噴霧電離(Electrospray Ionization, ESI)

ESI 的工作原理是將樣品溶液通過高壓針,產(chǎn)生帶電液滴,從而產(chǎn)生離子。它的多功能性非常突出,可以電離從小分子到大蛋白質(zhì)的各種化合物。ESI 與液相色譜法(LC)兼容,可實現(xiàn)無縫分離和后續(xù) MS 分析,是代謝組學和脂質(zhì)組學的首選。

串聯(lián)質(zhì)譜法(Tandem Mass Spectrometry, MS/MS)

MS/MS 分為兩個階段,首先分離離子,然后對選定的離子進行碎片化,最后對碎片進行分析。其優(yōu)勢在于提供詳細的結(jié)構(gòu)信息,尤其是肽的結(jié)構(gòu)信息。通過瞄準特定離子并監(jiān)測其碎片,MS/MS 提供了無與倫比的特異性和精確性,使其在蛋白質(zhì)組學和精確定量分析方面具有無可估量的價值。

質(zhì)譜樣品制備

為質(zhì)譜分析準備生物樣本的過程。這包括從復雜混合物中提取、純化和濃縮相關(guān)分子。其主要目的是確保樣品的形態(tài)適合質(zhì)譜分析,不含可能干擾質(zhì)譜讀數(shù)的污染物,并且濃度足以被檢測到。

如何實現(xiàn)質(zhì)譜樣品制備過程的自動化:

  • 移液工作站:這些工作站可以自動進行移液,減少人為錯誤并提高通量。
  • 自動化SPE系統(tǒng): 無需人工干預即可處理提取和凈化步驟。
  • 整合系統(tǒng): 一些系統(tǒng)可以集成樣品制備過程中從提取到凈化到濃縮的多個步驟。

質(zhì)譜樣品制備從未如此簡單

OT-2是一款臺式液體處理器,設計易于使用,足夠靈活,可以自動化許多常見應用。

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質(zhì)譜儀樣品制備自動化比手動移液的優(yōu)勢:

  1. 一致性和可重復性: 自動化減少了人為錯誤帶來的可變性。
  2. 吞吐量更高: 自動化系統(tǒng)可同時處理多個樣品,提高效率。
  3. 降低污染風險: 減少人工處理意味著減少引入污染物的機會。
  4. 節(jié)省時間: 自動化可讓研究人員專注于數(shù)據(jù)分析和解釋,而不是重復性的樣品制備任務。

資源聚焦

Opentrons 可幫助您通過 OT-2和Opentrons Flex的開源協(xié)議實現(xiàn)質(zhì)譜樣品制備自動化

質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)


氣相色譜-質(zhì)譜法(Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GC-MS)

氣相色譜-質(zhì)譜儀專門分析揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性化合物。它融合了氣相色譜法的分離能力和質(zhì)譜法的鑒定能力,通常用于法醫(yī)、環(huán)境監(jiān)測和風味分析。它的優(yōu)勢在于利用完善的庫對有機化合物進行精確鑒定。     

液相色譜-質(zhì)譜法(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS)

液相色譜-質(zhì)譜法將質(zhì)譜法的適用范圍擴展到熱敏性和非揮發(fā)性化合物。通過將液相色譜的廣泛分離能力與詳細的質(zhì)譜分析相結(jié)合,液相色譜-質(zhì)譜法在蛋白質(zhì)組學、藥物開發(fā)和代謝物分析中變得非常有價值。它能夠處理更大、更多樣的分子,彌補了 GC-MS 的不足。

GC-MS LC-MS
概述 氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用 液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用
樣品類型 揮發(fā)性和熱穩(wěn)定化合物 非揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定化合物
電離技術(shù) 電子轟擊電離(EI)、化學電離(CI) 電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學電離(APCI)
應用 法醫(yī)學、環(huán)境監(jiān)測、藥物檢測、風味分析 蛋白質(zhì)組學、藥物開發(fā)、代謝產(chǎn)物分析
復雜性與維護 中等;維護主要集中在柱子和質(zhì)譜的條件上 較高;可能出現(xiàn)柱子堵塞和污染
分辨率 高(取決于柱子和儀器) 高(取決于柱子和儀器)
典型用途 藥物檢測、環(huán)境污染物、代謝組學 生物分子、肽類、藥物、大型有機分子
檢測器靈敏度 對揮發(fā)性化合物靈敏度高 靈敏度高,尤其是現(xiàn)代檢測器,適用于更廣泛的化合物
優(yōu)點 對各種揮發(fā)性有機化合物有效,方法成熟且具有完善的數(shù)據(jù)庫 適用范圍廣,可以處理較大和更多樣的化合物
局限性 僅限于揮發(fā)性和熱穩(wěn)定化合物,電離時可能產(chǎn)生碎片化使光譜復雜化 由于多步驟操作,可能導致樣品損失或降解,靈敏度可能受基質(zhì)效應影響

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