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核酸提取磁珠法原理

隨著分子生物學技術(shù)的高速發(fā)展,以核酸雜交、核酸擴增及核酸序列分析為代表的分子診斷和檢測技術(shù)在諸多領(lǐng)域中日益凸顯出至關(guān)重要的作用。樣本處理為分子診斷實驗的“第一步”,也是最關(guān)鍵的一步,其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響到下游分子生物學試驗的成敗。全球爆發(fā)的新冠病毒,促使了核酸檢測市場的暴增,整個疫情期間國內(nèi)的核酸檢測市場將超過400億。

生物磁珠法核酸提取

核酸提取傳統(tǒng)方法
傳統(tǒng)的提取方法主要有:酚/氯仿抽提法、醇沉淀、親和層析柱、密度梯度離心和硅膠柱法。這些傳統(tǒng)提取方法可從不同組織樣本中分離出DNA和RNA,但這些技術(shù)中包含沉淀和離心等操作步驟,其所需的生物樣本量較大,提取步驟較為繁雜、費時費力,得率也不高,難以實現(xiàn)自動化操作,另外,大部分的傳統(tǒng)方法中還需要用到有毒化學試劑,對操作人員的健康具有潛在危害,因此,伴隨著分子生物學以及材料學的發(fā)展,采用磁珠的方法從液相系統(tǒng)中分離純化核酸的新方法已經(jīng)崛起。

磁珠法分離核酸的原理
納米磁珠是高分子材料或者生物分子包被四氧化三鐵核心而形成的,可以被磁鐵吸附的同時納米小球。用于核酸純化的磁珠表面功能基團一般為(OH)和羧基(COOH)。

磁珠分離核酸核心技術(shù)是固相可逆固定化技術(shù),但磁珠和核酸具體是如果相互作用吸附在一起,目前還不是很清楚,鹽橋理論是其中猜想之一。在利用磁珠結(jié)合核酸的體系中,由于緩沖液的作用核酸分子(DNA & RNA)會由線性變成球狀,暴露出核酸骨架上大量的負電基團與反應(yīng)體系中的陽離子連接,在磁珠外層負電基團的作用下,形成“陰離子-陽離子-陰離子”的鹽橋結(jié)構(gòu),使核酸分子被特異性地吸附到磁珠表面。而當反應(yīng)緩沖液被棄除后,加入水性分子,會快速充分水化核酸分子,解除三者之間的離子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被純化出來。

磁珠法核酸提取是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合。納米磁珠由于尺寸小,具有超大的比表面積。利用納米技術(shù)對磁珠表面進行修飾,使磁珠表面具有更多核酸結(jié)合位點,從提高了納米磁珠對核酸提取回收效率和靈敏度。

核酸提取具有如下特點:

  1. 磁珠生產(chǎn)工藝控制嚴格。每顆磁珠都呈現(xiàn)規(guī)整的球形,以保證低豐度樣本提取的穩(wěn)定性。
  2. 磁珠表面特殊化處理,可實現(xiàn)DNA/RNA共提取。
  3. 同樣適合低豐度樣本,包括游離DNA,病毒DNA和RNA。
  4. 產(chǎn)能穩(wěn)定,月產(chǎn)能可達10kg。
  5. 批次穩(wěn)定,不同批次核酸提取效率CV<10%。
  6. 可實現(xiàn)高通量和自動化操作,配合核酸提取儀最快可實現(xiàn)9min提取。
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