在生物科學(xué)的廣闊領(lǐng)域中，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）一直是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要工具。這種技術(shù)能夠快速?gòu)?fù)制微量的DNA樣本，為后續(xù)的研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。結(jié)合了先進(jìn)的機(jī)器人技術(shù)和精準(zhǔn)的溫控系的Opentrons Flex PCR工作站，使得PCR擴(kuò)增變得更加穩(wěn)定和可靠。無(wú)論是剛?cè)腴T(mén)的學(xué)生還是經(jīng)驗(yàn)豐富的科研人員，這個(gè)平臺(tái)都能幫助他們輕松實(shí)現(xiàn)高效且準(zhǔn)確的PCR擴(kuò)增。

Opentrons Flex PCR 工作站

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段
1、設(shè)計(jì)引物：
根據(jù)目標(biāo)DNA序列，利用專業(yè)的引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)出合適的引物對(duì)。
引物設(shè)計(jì)需考慮特異性、長(zhǎng)度、GC含量以及退火溫度等因素。
2、準(zhǔn)備模板DNA：
提取所需的DNA模板，并測(cè)定其濃度和純度。
確保模板DNA的濃度和純度滿足PCR反應(yīng)的要求。
3、配制PCR反應(yīng)體系：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，準(zhǔn)備PCR反應(yīng)混合液，包括DNA模板、引物、dNTPs（脫氧核苷三磷酸）、PCR緩沖液、MgCl?（如需要）、Taq DNA聚合酶等。
將所有成分按一定比例混合均勻，并分裝到PCR管中。

二、樣品裝載與儀器設(shè)置階段
1、預(yù)熱Opentrons Flex PCR工作站：
打開(kāi)工作站，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置預(yù)熱溫度，通常為94-96℃。
2、裝載樣品：
將配制好的PCR反應(yīng)混合液加入到PCR管中。
將PCR管放置在Opentrons Flex PCR工作站的樣品架上。
3、設(shè)置PCR循環(huán)參數(shù)：
在工作站的控制界面上，設(shè)置PCR擴(kuò)增的循環(huán)參數(shù)，包括變性、退火和延伸的溫度和時(shí)間，以及循環(huán)次數(shù)。
參數(shù)設(shè)置需根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求和目標(biāo)DNA序列的特性進(jìn)行優(yōu)化。

三、PCR擴(kuò)增階段
1、變性步驟：
將反應(yīng)器加熱至約93-98℃，保持一定時(shí)間（如20-30秒），使DNA雙鏈解離成單鏈。
2、退火步驟：
將溫度降至約50-65℃，保持一定時(shí)間（如20-40秒），使引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。
3、延伸步驟：
將溫度升至DNA聚合酶的最適溫度（通常為72℃），保持一定時(shí)間（根據(jù)目標(biāo)DNA片段的長(zhǎng)度和DNA聚合酶的能力而定），使DNA聚合酶以dNTPs為原料，合成新的DNA鏈。
4、循環(huán)擴(kuò)增：
重復(fù)上述變性、退火和延伸步驟，形成PCR擴(kuò)增的循環(huán)。
通常一個(gè)PCR過(guò)程會(huì)使用25-35個(gè)循環(huán)，每循環(huán)一次，目標(biāo)DNA片段的數(shù)量會(huì)翻倍。

四、擴(kuò)增結(jié)束與結(jié)果分析階段
1、最終延伸：
在所有循環(huán)結(jié)束后，通常會(huì)在72℃下進(jìn)行額外的延伸步驟，以確保所有未完成的DNA鏈都被充分延伸。
2、降溫與取出樣品：
擴(kuò)增結(jié)束后，Opentrons Flex PCR工作站會(huì)自動(dòng)降溫至4℃并保持，此時(shí)可以取出樣品。
3、結(jié)果分析：
通過(guò)凝膠電泳、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析。
觀察電泳圖譜中的DNA條帶，判斷PCR擴(kuò)增是否成功以及擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性和濃度。

五、實(shí)驗(yàn)后處理與儀器維護(hù)階段
1、清理工作區(qū)：
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時(shí)清理工作區(qū)域，避免交叉污染。
2、數(shù)據(jù)記錄：
記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括擴(kuò)增曲線、電泳圖等，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供參考。
3、儀器維護(hù)：
定期對(duì)Opentrons Flex PCR工作站進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

Opentrons Flex PCR工作站的PCR擴(kuò)增流程包括實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、樣品裝載與儀器設(shè)置、PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增結(jié)束與結(jié)果分析以及實(shí)驗(yàn)后處理與儀器維護(hù)等多個(gè)階段。每個(gè)階段都需要仔細(xì)操作，以確保PCR擴(kuò)增的準(zhǔn)確性和可靠性。

相關(guān)閱讀推薦

Opentrons 紐約 ISO 9001認(rèn)證證書(shū)

新冠肺炎疫情如何徹底改變了生命科學(xué)

移液白皮書(shū)：HEPA模塊

全自動(dòng)移液工作站用于培養(yǎng)基的配制的優(yōu)勢(shì)

OT-2 核酸提取工作站的吸頭規(guī)格

Opentrons Flex NGS 文庫(kù)制備工作站的功能