什么是流式細(xì)胞術(shù)？

流式細(xì)胞術(shù)是一種基于激光的復(fù)雜技術(shù)，用于評估細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子的表達(dá)。它是研究和診斷的核心，它能夠同時對單個細(xì)胞進(jìn)參數(shù)分析，有助于表征混合群體中的不同細(xì)胞類型，并可以測是細(xì)胞大小和體積。流式細(xì)胞術(shù)測定可確定分離的細(xì)胞亞群的純度，甚至對不同的細(xì)胞群進(jìn)行分類，這一過程稱為熒光激活細(xì)胞分選(FACS)。這是通過檢測用針對細(xì)胞蛋白或配體(如與 DNA 連接的碘化丙啶)的熒光抗體標(biāo)記的細(xì)胞發(fā)出的熒光強(qiáng)度來實(shí)現(xiàn)的。

什么是流式細(xì)胞儀？

根據(jù)其配置和預(yù)期應(yīng)用，流式細(xì)胞儀可具有各種組件和功能，包括：

• 流體系統(tǒng): 該系統(tǒng)以單列方式運(yùn)輸細(xì)胞，確保每次只有一個細(xì)胞通過激光束進(jìn)行分析。
• 激光器: 用于在細(xì)胞穿過光束時照亮細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞儀的配置，可能會有多個不同波長的激光器，以便同時檢測多個熒光標(biāo)簽。
• 光學(xué)系統(tǒng): 該系統(tǒng)檢測散射光和熒光。它包括鏡頭和濾光片，以確保檢測到適當(dāng)?shù)墓狻?
• 檢測器：將光信號轉(zhuǎn)換為電子信號，常見的檢測器包括用干前向散射(FSC)的光電二極管和用干側(cè)向散射(SSC) 和熒光的光電倍增管(PMT）。
• 電子系統(tǒng): 解釋從探測器接收到的信號并將其轉(zhuǎn)換為可以可視化和分析的數(shù)據(jù)點(diǎn)。

流式細(xì)胞術(shù)樣品制備方法

流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備包括創(chuàng)建單細(xì)胞懸浮液(通常來自細(xì)胞培養(yǎng)物或組織樣本)，然后將這些細(xì)胞與未標(biāo)記或熒光團(tuán)標(biāo)記的抗體一起孵育。以下是一些常見的 FC 樣品制備方法：

• 密度梯度離心: 該方法用于從血液等異質(zhì)樣本中分離特定細(xì)胞群，例如淋巴細(xì)胞。
• 直接免疫熒光染色: 用熒光染料結(jié)合的抗體直接對細(xì)胞進(jìn)行染色。
• 間接免疫熒光染色: 首先用未結(jié)合的一抗對細(xì)胞進(jìn)行染色，然后用識別一抗的熒光素結(jié)合的二抗對細(xì)胞進(jìn)行染色。

流式細(xì)胞術(shù)樣品制備為何如此閑難：

• 細(xì)胞活力:在制備過程中維持細(xì)胞健康和活力至關(guān)重要，但也很有挑戰(zhàn)性。
• 染色特異性:確保熒光標(biāo)記或抗體特異性結(jié)合，沒有非特異性染色或（背）景熒光。
• 樣本異質(zhì)性:處理混合多種細(xì)胞類型或狀態(tài)的樣本會使制備過程復(fù)雜化。

與手動移液相比，流式細(xì)胞儀樣品制備自動化的優(yōu)勢如下：

• 一致性: 自動化確保均勻的樣品處理，減少差異性并提高可重復(fù)性。
• 效率: 自動化系統(tǒng)可以同時處理多個樣本，簡化準(zhǔn)備過程。
• 減少樣品損失: 自動化設(shè)備可以更精確地處理樣品，從而最大限度地減少損失。
• 可靠性: 自動化減少人為錯誤并確保樣品制備的標(biāo)準(zhǔn)化方法。