蛋白質(zhì)結(jié)晶從未如此簡(jiǎn)單
OT-2 是一款臺(tái)面式液體工作站,設(shè)計(jì)方便靈活,可自動(dòng)處理許多常見(jiàn)應(yīng)用。
觀看視頻在蛋白質(zhì)進(jìn)入結(jié)晶狀態(tài)之前,它們通常處于溶液中的溶解狀態(tài)。在這種狀態(tài)下,蛋白質(zhì)分子分散在整個(gè)溶劑(通常是水或緩沖溶液)中,可以自由移動(dòng),但仍可能保持原生的折疊結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)結(jié)晶的目的是將這些分散的蛋白質(zhì)分子從溶液中轉(zhuǎn)變?yōu)橛行虻墓虘B(tài)晶格排列,形成晶體。找到合適的條件(如濃度、pH 值、溫度以及某些鹽或其他分子的存在),促使蛋白質(zhì)分子聚集在一起,形成這種有序的結(jié)構(gòu),從而促進(jìn)這種轉(zhuǎn)變。
蛋白質(zhì)結(jié)晶是分子生物學(xué)中的一項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù),它使科學(xué)家能夠以原子分辨率觀察蛋白質(zhì)。這種細(xì)致入微的觀察方式為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)方面提供了深刻的見(jiàn)解,包括:
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觀看視頻概述:蒸汽擴(kuò)散是一種廣泛應(yīng)用的蛋白質(zhì)結(jié)晶方法,它依賴于蛋白質(zhì)和沉淀劑的緩慢濃縮。當(dāng)水從蛋白質(zhì)溶液蒸發(fā)到儲(chǔ)層溶液時(shí),蛋白質(zhì)和沉淀劑的濃度就會(huì)增加。一旦溶液達(dá)到過(guò)飽和,晶體就會(huì)形成。
設(shè)置:無(wú)論是懸滴法還是坐滴法,都是將含有蛋白質(zhì)溶液和沉淀劑混合物的液滴放置在含有較高濃度沉淀劑的儲(chǔ)液器附近。在懸滴法中,液滴被放置在一個(gè)倒置的蓋玻片上,蓋玻片密封在儲(chǔ)液器上。在坐滴法中,液滴位于儲(chǔ)液器上方密封井內(nèi)的平臺(tái)上。
機(jī)制:隨著時(shí)間的推移,液滴中的水分蒸發(fā)并擴(kuò)散到儲(chǔ)液器中。這種蒸發(fā)將蛋白質(zhì)和沉淀物濃縮在液滴中,在有利條件下促進(jìn)結(jié)晶。
概述:在這種方法中,蛋白質(zhì)和沉淀劑直接混合在一起,系統(tǒng)不受干擾,讓晶體形成。
設(shè)置:在一個(gè)容器中將蛋白質(zhì)溶液與沉淀劑溶液混合。
機(jī)制:當(dāng)混合物中的條件變得有利時(shí)(通常是由于緩慢蒸發(fā)或由于蛋白質(zhì)分子與沉淀劑之間的特殊相互作用),蛋白質(zhì)分子開(kāi)始聚集在一起并有序排列,形成晶體。
概述:這是“批量結(jié)晶”的一種變體,專為非常小的體積設(shè)計(jì),以防止蒸發(fā)。
設(shè)置:將少量蛋白質(zhì)和沉淀劑混合在一個(gè)孔中,然后用一層油(如石蠟油或硅油)覆蓋,以防止蒸發(fā)。
機(jī)制:油層確保液滴內(nèi)的條件隨著時(shí)間的推移保持穩(wěn)定。沒(méi)有蒸發(fā)的影響,蛋白質(zhì)和沉淀劑可以在受控條件下相互作用,從而在適當(dāng)?shù)臈l件下實(shí)現(xiàn)結(jié)晶。
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