簡(jiǎn)介
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）是一種被廣泛應(yīng)用于診斷和研究領(lǐng)域的重要測(cè)試方法。在這項(xiàng)技術(shù)中，確保樣本處理的一致性至關(guān)重要，而減少人工操作時(shí)間則可以有效降低人為誤差。我們利用Opentrons OT-2 和 Flex 液體處理工作站，開發(fā)并測(cè)試了多種自動(dòng)化協(xié)議。通過這些自動(dòng)化協(xié)議，您可以直接使用 ELISA 試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，也可以根據(jù)需要定制特定的實(shí)驗(yàn)流程。

方法

試劑盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit
（夾心法ELISA，圖1）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標(biāo)抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測(cè)方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit
（競(jìng)爭(zhēng)法ELISA，圖2）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）&標(biāo)記抗原
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 檢測(cè)方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
  （競(jìng)爭(zhēng)法ELISA，圖3）
• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲） & 標(biāo)記ACE2
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 檢測(cè)方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
  (磁珠式ELISA, 圖4)
• 儀器: Opentrons OT-2 & 磁力架模塊
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標(biāo)抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測(cè)：細(xì)胞因子檢測(cè)的測(cè)定方法開發(fā)（夾心法 ELISA，圖 5 ）
儀器: Opentrons Flex
工作流程:
1 .ELISA 板準(zhǔn)備
2.洗滌
3.加樣（靶向捕獲）
4.洗滌
5.加酶標(biāo)抗體
6.洗滌
7.加底物顯色

結(jié)果

圖 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（圖 1 ）。對(duì)FN樣品進(jìn)行梯度稀釋并檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果如圖所示:
左圖為FN樣品濃度和平均吸光度（n=3）數(shù)據(jù)，呈高度線性回歸；右圖為3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，呈現(xiàn)良好
的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

圖 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit （圖 2 ）。對(duì)皮質(zhì)醇樣品進(jìn)行梯度稀釋并檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果如圖
所示：左圖為皮質(zhì)醇樣品濃度和平均吸光度（n=3）數(shù)據(jù)，呈高度線性回歸；右圖為3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)
果，呈現(xiàn)良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

圖 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate（圖 3 ）。檢驗(yàn)結(jié)果表明，陽性的人血清樣本（
之前已通過 FDA 認(rèn)證的 ELISA 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陽性），在該測(cè)試中呈現(xiàn)結(jié)果為陽性（抑制率 >
20%，計(jì)算公式：抑制率 = [1 - (樣本的OD450值 / 陰性對(duì)照的OD值)] x 100% ，n = 3）。

圖 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads（圖 4 ）。對(duì)重組中和抗體樣品進(jìn)
行梯度稀釋并檢驗(yàn)。檢驗(yàn)結(jié)果表明，陽性的人血清樣本（之前已通過 FDA 認(rèn)證的 ELISA 實(shí)驗(yàn)
檢測(cè)結(jié)果為陽性），在該測(cè)試中呈現(xiàn)結(jié)果為陽性（n = 3）（右）。

圖 10. Assay Development for Cytokine Detection（圖 5 ）。在 96 孔板涂覆抗 TNF-alpha
抗體和抗IFN-gamma抗體，對(duì)含有細(xì)胞因子的樣品進(jìn)行ELISA檢測(cè)，數(shù)據(jù)如圖所示
（n=6）。

結(jié)論

• 該工作站可以用于執(zhí)行從加抗體/抗原到加顯色底物的完整 ELISA 流程
• 結(jié)果表明樣本處理的一致性高（變異系數(shù)<10%）、準(zhǔn)確性高（R-squared>0.99），重復(fù)性
  好。
• 以 SARS-CoV-2 抗體檢測(cè)為例，基于 96 孔板的商用試劑和基于磁珠的自制 ELISA 試劑均可
  實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化處理，且結(jié)果與 FDA 認(rèn)證的 Elisa 方法測(cè)定結(jié)果一致。