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在核酸提取、蛋白純化、細胞分離等分子生物學實驗中,磁珠法憑借其高效性和自動化兼容性被廣泛采用。然而,很多科研人員在實驗中遇到一個共性問題:磁珠回收率低,導致目標產(chǎn)物丟失。追根溯源,其中一個核心原因就是——磁珠吸附時間不足。本篇將深入解析這個問題的機理,并提供可操作的優(yōu)化方法,幫助科研工作者與實驗室人員提升磁珠回收效率、降低實驗誤差。
一、磁珠吸附不完全的表現(xiàn)與后果
常見表現(xiàn):
磁珠團形成稀松、漂浮不穩(wěn)定;
分離后目標產(chǎn)物濃度偏低;
重復實驗數(shù)據(jù)波動大、重復性差;
吸附過程時間過短或流程中斷。
直接后果:
核酸或蛋白回收率降低;
移液頭易誤吸磁珠造成堵塞或交叉污染;
實驗重復次數(shù)增加,影響效率與成本。
二、磁珠吸附時間不足的常見原因
操作流程設定不合理(特別是在自動化移液系統(tǒng)中);
磁珠濃度過低,導致結(jié)合不充分;
樣本混勻不均,磁珠與目標物未充分接觸;
磁場過強過早啟動,導致磁珠聚集未完成吸附;
溫度過低,影響結(jié)合反應效率。
三、如何正確調(diào)整磁珠吸附時間?
延長吸附時間至推薦標準
對于常見核酸提取實驗,吸附時間一般建議控制在5~10分鐘;
蛋白或復雜樣本體系中,吸附時間可延長至15~20分鐘;
若使用自動化工作站,確保軟件中吸附步驟有明確“等待”設定。
加強混勻,提升結(jié)合效率
吸附前應充分顛倒混勻或使用震蕩平臺;
混勻速率控制在中低速,避免泡沫干擾吸附;
自動化系統(tǒng)應啟用“Mix”功能2~3輪。
優(yōu)化磁珠與樣品比例
建議使用供應商推薦的磁珠體積:DNA提取時常為樣品體積的1~2倍;
若目標物濃度較低,可適當增加磁珠體積(注意不過量,避免非特異吸附)。
調(diào)整溫度條件
大多數(shù)磁珠結(jié)合在室溫(20–25°C)下效果最佳;
在低溫環(huán)境下操作(如冷室)時應適當延長吸附時間或預熱樣本。
使用“反吸附”策略提升結(jié)合率
對于難吸附樣本,可嘗試先短時間吸附(3分鐘),再重新混勻+吸附一次;
該方法可提升低濃度樣本的目標物捕獲率。
四、如何驗證吸附是否充分?
目視觀察磁珠分布狀態(tài):吸附充分時,磁珠應緊密聚集在管壁或磁柱邊緣;
測試上清液目標物殘留量:吸附后取上清液檢測殘留DNA/蛋白濃度;
使用染料或熒光標記實驗進行吸附驗證。
磁珠吸附不是越快越好,而是需要精準控制時間與環(huán)境參數(shù),實現(xiàn)目標物與磁珠的充分結(jié)合。通過合理設定吸附時間、優(yōu)化操作步驟、關(guān)注反應條件,能顯著提升實驗回收率與重現(xiàn)性。如需獲取定制化磁珠提取方案或自動化吸附流程設置建議,歡迎聯(lián)系我們的技術(shù)專家團隊,我們將為您的實驗室效率提升提供專業(yè)支持。
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